细胞复苏技术是细胞培养中至关重要的一环，南宫28NG相信品牌力量，为您提供专业的细胞复苏指导。细胞培养是指将取自体内组织的细胞在体外模拟内环境，使其生长、繁殖，同时维持其结构与功能的技术。培养的细胞可以是单细胞或细胞系。接下来，我们将详细介绍细胞复苏的流程及其注意事项。

01、细胞复苏的原理

细胞复苏是将冻存于液氮或-70℃冰箱中的细胞解冻后，重新培养以恢复其生长的过程。随着温度回升，细胞的形态结构正常，生化反应随之恢复。细胞复苏需快速升温，原则为慢冻快融，以防止解冻过程中水分进入细胞形成冰晶，从而影响细胞存活率。

02、细胞复苏的实验步骤

1. 从液氮罐中取出冻存管，将其放置于-80℃冰箱数分钟，快速置入37℃水浴中，不时摇动，使其在2分钟内迅速融化。注意冻存管口不得浸入水中，以避免污染，复苏过程中细胞死亡率一般为25%左右。

2. 融化后，使用75%酒精对冻存管外部进行消毒，打开盖子，将细胞悬液缓慢加入含培养液的T25或T75培养瓶中，并在37℃、5%CO2条件下培养。如果细胞需要去除冷冻保护剂，可将细胞悬液转移至无菌离心管，加入5ml完全培养基，选择合适的离心速度低速离心5分钟，弃去上清后加入2-3ml预热的完全培养基，轻轻混匀，确保细胞完全重悬。

3. 用培养液适当稀释后，将重悬的细胞接种于培养皿或T25/T75培养瓶中，继续在37℃、5%CO2条件下培养，24小时后更换新鲜培养基，去除死细胞，三天更换一次培养基，待细胞生长至80-90%汇合后进行传代。

03、细胞复苏的注意事项

1. 取冻存细胞时需做好防护，佩戴防冻手套和护目镜，以免液氮吸入引起危险。同时，避免因温差变化导致冻存管爆炸。

2. 解冻时用镊子夹住细胞冻存管并在水浴中轻轻晃动，以确保受热均匀，速度越快越好，以最大限度地保持细胞活力，避免水侵入冻存管造成污染。

3. 打开冻存管前务必用酒精棉球消毒，确保无菌操作，在进行细胞操作时，要在4℃冰盒中进行，以减少冷冻保护剂对细胞的毒性。

4. 解冻应在2分钟内完成，整个过程中要避免因气泡产生对细胞生长产生不良影响。

5. 尽量避免冻存管接缝处的水分，以防支原体污染，实验室需定期使用过氧化氢进行熏蒸，并在细胞小黑点增多时用支原体检测试剂盒检测。

04、如何避免冻存管爆炸

1. 选择高质量的进口内旋冻存管，确保盖子拧紧，防止液氮进入管内，平时常用的细胞则放置在-80℃冰箱。

2. 冻存时增加冻存液的体积，例如在2ml冻存管中加18ml冻存液，保留适量空间。

3. 取细胞时佩戴手套和防护眼镜，准备镊子，避免手部直接接触冻存管导致冻伤。

4. 取出细胞前先在液氮罐上方的蒸汽中停留片刻，然后再仔细取出，确保冻存盒的残余液氮流回罐内，以避免冻伤。

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