南宫28NG相信品牌力量提供的RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞培养指南旨在帮助研究人员高效准确地进行细胞培养。

一、细胞培养条件

细胞名称：RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% 双抗

传代方法：建议首次传代比例为1:2。传代情况每两天换液。

备注：请使用无菌离心管收集培养基，以便进行对比培养。如对比效果不理想，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，首先将其培养至良好状态，然后灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方式。用75%酒精喷洒整个细胞瓶以进行消毒，随后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶置于37℃和5% CO2的培养箱中静置3至4小时以稳定细胞状态，然后进行后续处理。利用显微镜观察细胞生长情况，并拍照保存不同倍数的显微图像（建议40x、100x、200x各一张）。前三天的照片被视作重要售后依据，未提供照片则默认收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞未达到80%汇合度，将完全培养液收集至离心管（保留5ml），并放入37℃、5% CO2的孵化器中培养；若细胞密度超过80%，则可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS对细胞冲洗1-2次。
2. 添加1-2ml的消化液（0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA），在37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态；若细胞大部分变圆并脱落，立即轻轻敲击培养瓶，添加超过5ml的完全培养基以终止消化过程。
3. 轻轻吹打细胞以使其完全脱落，吸出悬液后转移至15ml离心管，并在1000RPM下离心5分钟，弃去上清液，以1-2ml的培养基重悬细胞。
4. 按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 待细胞覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加约1ml的消化液至培养瓶中，在显微镜下观察；当细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养基以终止消化，然后轻轻吹打使细胞脱落，并将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟。
3. 弃去上清液，沉淀细胞并加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混合均匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接置于-80℃的冰箱中，若需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（需佩戴防护装备），迅速置于37℃水浴中解冻，直到冻存管内无结晶。随后用75%酒精擦拭管外壁。
2. 将冻存细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清液，用5ml完全培养基重悬细胞，并接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2的培养箱中继续培养。
4. 第二天，通过更换新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞在运输过程中可能不牢固，容易脱落，属于正常现象。处理步骤可以参考以下方法：将培养液收集至离心管，在1000RPM下离心5分钟。收集上清进行过渡培养，并沉淀后加入1-2ml胰蛋白酶，轻轻吹打并重悬，待消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清后加入1-2ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

五、售后条款

若细胞出现问题，请注意以下重发标准：1）细胞在运输途中遭遇问题（如细胞丢失、瓶身破损及培养液严重漏液等）可重发；2）细胞污染问题请在收到产品48小时内提供真实实验结果，经核实后可重发；3）常温发货的细胞在静置24小时后，或干冰冻存发货的细胞复苏后24小时大部分未存活的，需提供真实清晰的细胞状态照片方可重发；4）若细胞在复苏后24小时未存活或未开封静置4小时出现污染，则可重发；5）若在收到产品7天内反馈细胞活性问题，并通过台盼蓝染色法鉴定需重发；6）收到细胞当天及第2、3天需拍照，以后台记录为依据，若3天未告知视为产品合格；7）如用户在4-7天内出现问题，需提供收到细胞前3天的照片以及详细的操作步骤，经技术人员判定，再决定是否重发。

不予重发的情况包括但不限于：客户造成的细胞污染，客户不当操作导致细胞状态不佳，使用非本库推荐的培养体系，未提供前3天的照片，细胞受到其他处理，收到后2天内未告知等。

我们始终秉持南宫28NG相信品牌力量，致力于为广大科研工作者提供高品质的细胞培养服务，以助力科学研究的进展。