南宫28NG相信品牌力量为您提供详细的大鼠肺泡上皮细胞L2培养说明书。以下内容将帮助您更好地理解细胞培养的关键步骤和注意事项。

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肺泡上皮细胞L2
生长特性：贴壁生长
冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% 双抗
传代方法：第一次建议1:2传代。
每两天则需更换培养液。
备注：使用无菌离心管收集培养基以进行对比培养，若效果不佳，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞处理步骤

收到细胞后，待其培养至良好状态，灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方法。处理前，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续操作。显微镜观察细胞生长情况，并对不同倍数拍照保存（推荐40x、100x、200x各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，若未提供照片则默认收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，可将瓶内培养液收集至离心管中，留下5ml完全培养基并放入37℃、5% CO2孵箱中培养。若细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 向培养瓶中添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态。若大部分细胞变圆并脱落，迅速轻拍培养瓶，然后加入≥5ml完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，确保完全脱落后吸出，将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM离心5分钟，弃去上清液，重悬加入1-2ml完全培养基。
4. 按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新完全培养基至5-8ml/瓶后，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，待细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养液终止消化，小心地吹打细胞使其脱落，随后将悬液转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀，转移至冻存管中。
4. 冻存细胞直接置于-80℃冰箱。若后期需转入液氮罐，应在-80℃冰箱存放24小时以上再转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），快速置于37℃水浴中解冻至无结晶后，用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清后，用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天更换新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，部分细胞可能会因贴壁不牢而脱落，这属于正常现象。处理方法：将培养瓶内所有培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟，之后收集上清进行过渡培养，再加入胰酶1-2ml，轻轻吹打后重悬于新培养基中。按1:2比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基后放入37℃、5% CO2培养箱中。

五、售后条款

若细胞出现问题，可重发的情况包括：运输过程中细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液，或在收到后48小时内报告的细胞污染问题等。请务必提供真实的实验结果并附带相应的照片。若细胞在运输后状态不良或活性不足，具体的重发细则请和我们沟通以便进一步处理。

南宫28NG相信品牌力量致力于为您提供优质的细胞培养产品及服务，确保您在研究与实验中取得最佳效果。