一、简介

南宫28NG相信品牌力量，作为一种广泛应用于生物医疗领域的蛋白定量检测方法，BCA（双缩脲酸）法以其高灵敏度和准确度著称。该方法的原理在于蛋白质与铜离子在碱性环境下形成稳固的紫红色复合物，通过与标准曲线进行对比，能够精准测定待测样品中的蛋白浓度。其操作简单且抗干扰能力强，因此被广泛应用于生物化学及相关研究。

二、实验步骤

1. 试剂准备

(1) BCA工作液：按50:1的比例将BCA试剂A与B混合，摇匀备用。

(2) 标准蛋白溶液：取适量标准蛋白，使用PBS或去离子水溶解，制备成1mg/mL的标准蛋白溶液。

2. 蛋白样品制备

(1) 细胞裂解：对细胞样品进行离心，去除上清液后加入细胞裂解液，在冰上裂解30分钟，确保细胞充分裂解。

(2) 去除杂质：再次离心去除沉淀，保留上清液，并加入适量SDS至终浓度为0.1%，充分混合。

(3) 标准曲线制备：取适量标准蛋白溶液，加入SDS使终浓度为0.1%，稀释成不同浓度的标准蛋白溶液。使用96孔板，分别加入不同浓度标准蛋白溶液（每个浓度设3个复孔），然后加入BCA工作液，充分混合。根据说明书要求，在特定波长下测量吸光度值，并绘制标准曲线。

3. 蛋白定量检测

(1) 取适量待测蛋白样品，加入SDS至终浓度为0.1%，充分混匀。以标准曲线制备方法加入BCA工作液，测量吸光度值。

(2) 根据标准曲线查找待测蛋白样品的浓度。若样品浓度较高，建议进行适当稀释再测定。

三、注意事项

1. BCA工作液应在4℃避光保存，避免反复冻融。

2. 实验过程中保持样品及标准蛋白溶液的pH值一致，以确保结果准确性。

3. 注意防止交叉污染，避免影响实验结果。

4. 对于特殊的蛋白样品，可能需要采用其他定量检测方法。