## 背景介绍

裸露的RNA分子因带负电荷而呈现亲水性，这使得它们在细胞膜的静电排斥下难以有效进入细胞，同时也容易遭到普遍存在的RNA酶的快速降解。因此，为了实现RNA的有效递送，必须为其设计保护性外壳。细胞膜主要由脂质构成，利用脂质囊泡包裹RNA能够帮助其穿过细胞膜并释放到细胞质中。理想的囊泡应为带正电的脂质，以便能与负电的RNA结合。然而，由于永jiu性阳离子脂质成分的囊泡容易与带负电的细胞膜发生静电作用，导致细胞毒性，因此改良后的脂质结构应能够对内体的酸性环境产生响应并带上正电荷。

## 脂质纳米粒结构

脂质纳米粒（LNP）通常由四种关键成分组成：可离子化的阳离子脂质、两性离子磷脂（PL）、胆固醇和PEG化脂质。LNP作为mRNA传递系统，其作用机制包含多个步骤，确保mRNA能够安全有效地递送到目标细胞并进行蛋白表达。在LNP中，可离子化的阳离子脂质扮演着重要角色，能够在自组装过程中负载负电的RNA；在中性pH下不带电以减少细胞毒性，并在细胞吸收后再次带正电以促进内体的逃逸。胆固醇和PEG脂质变体被证实能够调节LNP的物理性质和纳米结构，提升其最终效果。两性离子磷脂通常被称为“辅助脂质”，LNP在保护mRNA、促进细胞内部传递以及激活免疫反应方面具有关键作用。

## LNP转染实验步骤

以下转染步骤为6孔板的单孔参考条件，其他培养形式请参阅表1。

1. mRNA预混液制备：将25 µg mRNA（浓度为1 µg/µL）与60 µL Buffer混合。
2. mRNA-easyLNP复合物制备：将625 µL mRNA预混液与625 µL easyLNP纳米混悬液混合，涡旋2-3秒以混匀。
3. 加入细胞：将125 µL mRNA-easyLNP复合物加入细胞，轻轻晃动使其均匀分散。
4. 分析时间：培养24-48小时后进行分析。

## 表1：根据每孔使用的细胞培养容器的mRNA转染指南

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