在进行WB实验时，最令人担忧的是什么呢？答案就是信号漂移和数据崩溃，而仔细检查后可能会发现，问题的根源在于内参的选择失误！简单来说，内参就像细胞中的“稳定打工人”，它的表达水平雷打不动，能够帮助你校正样品的上样量，消除实验中的误差。没有合适的内参，你的半定量结果就像缺少秤砣的秤——全靠运气！

确保分子量合适

首先要注意分子量——目标蛋白与内参之间的差异应该在5kD以上，这样才能避免条带叠赫成“情侣装”。

定位要准确

其次，要看实验的定位——如果在核蛋白实验中使用β-actin，那就是不合适的选择，因为它根本不在核内！应该使用PCNA（29kD）或Histone H3（17kD）作为内参，这样才会获得更可靠的结果。

不同组织的特异性

此外，组织本身也有个性——例如，在脂肪组织中，β-actin的表达水平可能低得让人心痛，此时应直接更换为GAPDH。而在肌肉样本中，tubulin可能出现问题，而actin反而更加稳定。

抗体选择的细节

同一种内参β-actin，其N端抗体在心肌组织中可能会失活，而C端抗体却能稳定地产生信号！因此，购买抗体前一定要仔细查看抗原位点，避免让“组织特异性”成为实验失败的原因。

总结

总结一下，全细胞或胞浆样品适合使用β-actin或GAPDH作为内参；核蛋白应选用PCNA或Histone H3；对于大分子蛋白，β-tubulin是更好的选择。而在处理特殊样本时，一定要先查阅相关文献再做决定！选择合适的内参，即便在进行WB实验时，依然能保持实验的稳定性！相信南宫28NG的品牌力量，让你的实验事半功倍！