在细胞培养应用的领域中，我们通常将细胞分为两种类型：贴壁细胞与悬浮细胞。贴壁细胞需要附着在培养皿的表面才能生长，而悬浮细胞则可以在液体培养基中自由漂浮并增殖。表面似乎只有贴壁细胞才需要考虑培养皿的表面特性及是否需要涂覆胶原蛋白或多聚赖氨酸（poly-L-lysine, PLL）等物质来增强细胞附着力。然而，如果你认为“悬浮细胞不需要任何涂覆处理”，你可能被它们自由的外观所误导。实际上，在某些关键的实验步骤中，悬浮细胞也可能需要短暂「靠岸」，甚至需要涂覆表面的辅助。因此，今天我们将探讨悬浮细胞为何有时也需要涂覆，如何正确进行涂覆，以及涂覆的目的是什么。

悬浮细胞≠永远不附着

在细胞培养的世界里，贴壁细胞与悬浮细胞的区别十分明显，但悬浮细胞并非在任何情况下都可以不进行涂覆处理。在某些实验中，这类细胞可能需要依赖涂覆的表面来提供额外的支持和稳定性。

什么是多聚赖氨酸（PLL）涂覆？

多聚赖氨酸（poly-L-lysine, PLL）是一种人工合成的阳离子多肽，具备丰富的氨基基团，使其整体带有强正电荷。在细胞膜表面通常带负电的情况下，PLL通过静电作用可以帮助细胞「吸附」在表面上。它广泛应用于：

• 难以附着的初代神经元、干细胞等细胞的培养
• 组织切片或细胞爬片的固定染色
• 增强某些表面抗体或细胞的结合力

在贴壁细胞中，PLL涂覆可提高细胞的附着速度与均匀性；而在悬浮细胞中，PLL更多用于短期固定与功能性实验的配合。

悬浮细胞需要涂覆的常见场景

1. 免疫荧光成像与免疫染色：如果悬浮细胞在普通培养皿中操作，可能在洗涤过程中被吸头吸走，或在成像时漂移影响结果。将细胞放置在PLL涂覆的玻片或培养皿中，可以实现短期固定，从而提高图像的稳定性与信噪比。

2. 电转染后细胞收集：电转后的悬浮细胞在恢复期通常比较脆弱。如果直接离心可能会失去大量活细胞，因此在PLL涂覆的培养板中短暂培养4-6小时，使部分细胞贴附后再进行回收，这样可以提高后续转染的效率和活性细胞的比例。

3. 细胞富集或原位功能检测：在某些实验中，如ELISPOT、细胞毒性检测、代谢产物探测等，需要在细胞「原位」观察反应。这类实验对细胞分布的稳定性要求较高，因此常用PLL或细胞外基质进行涂覆以固定悬浮细胞。

4. 悬浮细胞低密度培养聚团问题：在低密度培养时，悬浮细胞可能因为漂浮过快而无法扩增，或出现异常聚团影响观察。适当的涂覆可以形成一些「锚点」，减少细胞间漂浮产生的干扰。

5. 外泌体/病毒收集实验中的细胞定点处理：在外泌体研究中，为了保持细胞的分泌状态稳定，有时会选择在轻度PLL涂覆的条件下固定悬浮细胞，避免漂浮密度差异对上清产物一致性的影响。

如何正确使用PLL涂覆？

涂覆的并非目的是让悬浮细胞像贴壁细胞一样长期生长。大多数情况下，这种涂覆是为了：

• 实验窗口期的短暂固定
• 提高操作效率与成像质量
• 增强细胞在某些实验平台上的一致性

长期附着可能会影响细胞状态，甚至改变其生物学特性，因此需要根据实验目的合理设置处理的时间和强度。

什么时候不应使用涂覆？

当然，并非所有的悬浮细胞实验都需要涂覆处理。在以下情况下，最好避免使用：

• 对于长期培养的悬浮细胞，如293F在生物反应器中培养，不宜加涂覆，相反应使用低附着力的培养皿（如聚HEMA处理）
• 需要完全无附着状态的实验，如某些免疫学流式功能检测、抗体介导的细胞毒性测试等，涂覆可能影响结果的真实性。

总结

悬浮细胞也会有需要「靠岸」的时候。无论是为了成像、细胞收集、固定，还是维持操作的稳定性，适当的表面涂覆（如PLL）在关键环节中能够显著提升实验的成功率与数据的质量。在科学实验中，适时适地的处理手法是一项重要的技巧。南宫28NG相信品牌力量，关注悬浮细胞的操作细节，以提升您的实验效果！